顯微鏡的七種觀察方式
ij(4)= 一、明視野觀察(Bright field)
j 3MciQ` 明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式,廣泛應(yīng)用于病理、檢驗,用于觀察被染色的切片,所有顯微鏡均能完成此功能。
bjBeiKH kLVn(dC " 二、暗視野觀察(Dark field)
6rQpK&Jx 暗視野實際是暗場
照明發(fā)。它的特點和明視野不同,不直接觀察到照明的光線,而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線。因此,
視場成為黑暗的背景,而被檢物體則呈現(xiàn)明亮的象。
(bx\4Ws 暗視野的原理是根據(jù)
光學(xué)上的丁道爾現(xiàn)象,微塵在強光直射通過的情況下,人眼不能觀察,這是因為強光繞射造成的。若把光線斜射它,由于光的反射,微粒似乎增大了體積,為人眼可見。
%W4aKb?BT m.. 暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡。它的特點是不讓光束由下至上的通過被檢物體,而是將光線改變途徑,使其斜射向被檢物體,使照明光線不直接進入
物鏡,利用被檢物體表面反射或衍射光形成的明亮圖象。暗視野觀察的
分辨率遠高于明視野觀察,最高達0.02—0.004
Dsj|~J3 [u9JL3 三、相差鏡檢法(Phase contrast)
2ly,l[p8 在光學(xué)顯微鏡的發(fā)展過程中,相差鏡檢術(shù)的發(fā)明成功,是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就。我們知道,人眼只能區(qū)分光波的
波長(顏色)和振幅(亮度),對于無色通明的生物標本,當(dāng)光線通過時,波長和振幅變化不大,在明場觀察時很難觀察到標本.
'95E;RV& 相差顯微鏡利用被檢物體的光程之差進行鏡檢,也就是有效地利用光的干涉現(xiàn)象,將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿词故菬o色透明的物質(zhì)也可成為清晰可見。這大大便利了活體細胞的觀察,因此相差鏡檢法廣泛應(yīng)用于倒置顯微鏡。
BO4 K#H7 相差顯微鏡的基本原理是,把透過標本的可見光的光程差變成振幅差,從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度,使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。光線透過標本后發(fā)生折射,偏離了原來的光路,同時被延遲了1/4λ(波長),如果再增加或減少1/4λ,則光程差變?yōu)?/2λ,兩束光合軸后干涉加強,振幅增大或減下,提高反差。在構(gòu)造上,相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個特殊之處:
@qPyrgy 1. 環(huán)形光闌(annular diaphragm) 位于
光源與聚光器之間,作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐,焦聚到標本上。
EotwUT| 2. 相位板(annular phaseplate)在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板,可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種:
@ 9 {%Kn 1. A+相板:將直射光推遲1/4λ,兩組光波合軸后光波相加,振幅加大,標本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變亮,形成亮反差(或稱負反差)。
pTALhj#, 2. B+相板:將衍射光推遲1/4λ,兩組光線合軸后光波相減,振幅變小,形成暗反差(或稱正反差),結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變暗
~$4.Mf,u }utNZhJ 四、微分干涉稱鏡檢術(shù)(Differential interference contrast DIC)
P$3=i`X!nw 微分干涉鏡檢術(shù)出現(xiàn)于60年代,它不僅能觀察無色透明的物體,而且圖象呈現(xiàn)出浮雕壯的立體感,并具有相襯鏡檢術(shù)所不能達到的某些優(yōu)點,觀察效果更為逼真。
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