激光掃描共聚焦顯微鏡(LaserscanningConfocalMicroscopy,簡稱LSCM)是近代生物醫(yī)學(xué)圖象儀器的最重要發(fā)展之一,它是在熒光顯微鏡成象的基礎(chǔ)上加裝激光掃描裝置,使用紫外光或可見光激發(fā)熒光探針,利用計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖象處理,從而得到細(xì)胞或組織內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖象,以及在亞細(xì)胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信號(hào)及細(xì)胞形態(tài)的變化。已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、生理學(xué)、病理學(xué)、解剖學(xué)、胚胎學(xué)、免疫學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)等領(lǐng)域,對(duì)生物樣品進(jìn)行定性、定量、定時(shí)和定位研究具有很大的優(yōu)越性,為這些領(lǐng)域新一代強(qiáng)有力的研究工具。
[Uw/;Kyh >,s.!vpK 創(chuàng)建于1983年的美國Meridian公司,在90年代推出的“激光掃描共聚焦顯微鏡”這一項(xiàng)具有劃時(shí)代的義意的高科技產(chǎn)品,曾獲得美國“政府新產(chǎn)品獎(jiǎng)”和兩次“高科技領(lǐng)先技術(shù)獎(jiǎng)”,它能達(dá)到每秒120幅畫面的高速掃描激光共聚焦觀察,可提供實(shí)時(shí),真彩色的激光共聚焦原色圖象。我院最近引起的ACASuLTIMA312是Meridian公司最新的高科技產(chǎn)品,為同類儀器中檔次最高、功能最全的精密儀器。現(xiàn)以該儀器為例介紹激光掃描共聚焦顯微鏡系統(tǒng)及其在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用。
1feS/l$ -cW'g 1、激光掃描共聚焦顯微鏡成像原理及組成
^t#W?rxp& hAv.rjhw_ 有關(guān)共聚焦顯微鏡的某些技術(shù)原理,早在1957年就已提出,二十年后由Brandengoff在高數(shù)值孔徑透鏡裝置上改裝成功具有高清晰度的共聚焦顯微鏡,1985年WijnaendtsVanResandt發(fā)表了第一篇有關(guān)激光掃描共聚焦顯微鏡在生物學(xué)中應(yīng)用的文章,到了1987年,才發(fā)展成現(xiàn)在通常意義上的第一代激光掃描共聚焦顯微鏡。
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