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    [分享]激光掃描共焦顯微鏡技術(shù)及其應(yīng)用 [復(fù)制鏈接]

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    只看樓主 倒序閱讀 樓主  發(fā)表于: 2007-07-18
      樣品要求: R% XbO~{u  
    1.經(jīng)熒光探劑標(biāo)記(單標(biāo)、雙標(biāo)、三標(biāo)) yB(^t`)}N  
    2.固定的或活的組織 6R5) &L  
    3.固定的或活的貼壁培養(yǎng)細(xì)胞(Confocal專用小培養(yǎng)皿,蓋玻片) #X7fs5$&  
    4.懸浮細(xì)胞,甩片或滴片后,用蓋玻片封 sj003jeko  
    一. 組成 %VsuG A  
        倒置或直立熒光顯微鏡、掃描頭(照明針孔、探測針孔、熒光濾片系統(tǒng)、鏡掃描系統(tǒng)和光電倍增管)、掃描頭控制電路、計算機(jī)和圖像輸出設(shè)備 |/zE(ePc{  
    二. 原理 i Nf+ -C3  
    Confocal 9}t2OJS*h"  
        利用放置在光源后的照明針孔和放置在檢測器前的探測針孔實(shí)現(xiàn)點(diǎn)照明和點(diǎn)探測,來自光源的光通過照明針孔發(fā)射出的光聚焦在樣品焦平面的某個點(diǎn)上,該點(diǎn)所發(fā)射的熒光成像在探測針孔上,該點(diǎn)以外的任何發(fā)射光均被探測針孔阻擋。照明針孔與探測針孔對被照射點(diǎn)或被探測點(diǎn)來說是共軛的,因此被探測點(diǎn)即共焦點(diǎn),被探測點(diǎn)所在的平面即共焦平面。計算機(jī)以像點(diǎn)的方式將被探測點(diǎn)顯示在計算機(jī)屏幕上,為了產(chǎn)生一幅完整的圖像,由光路中的掃描系統(tǒng)在樣品焦平面上掃描,從而產(chǎn)生一幅完整的共焦圖像。只要載物臺沿著Z軸上下移動,將樣品新的一個層面移動到共焦平面上,樣品的新層面又成像在顯示器上,隨著Z軸的不斷移動,就可得到樣品不同層面連續(xù)的光切圖像。 v#:#w.]-Y  
    三. 激光掃描共焦顯微鏡的設(shè)計特點(diǎn): `p9h$d  
    1.點(diǎn)照明 +](^gaDw<L  
    2.具有照明pinhole和探測pinhole f;#hcRSH  
    3.照明pinhole和探測pinhole共軛(共焦), 共焦點(diǎn)即被探測點(diǎn),被探測點(diǎn)所在的平面為共焦平面 ? e%Pvy<i  
    4.具有掃描系統(tǒng)―― 逐點(diǎn)掃描成像 G_=`&i"4  
    5.具有多個(四個) 熒光通道,可同時探測多個被標(biāo)記物 :<Y,^V(  
    Leica TCS NT 的技術(shù)指標(biāo): 9)s=%dL  
    1. xy分辨率比傳統(tǒng)顯微鏡小1.4x xlkEW&N&  
    傳統(tǒng)顯微鏡: Rxy=0.61l/NA @rkNx@[~  
    Confocal: Rxy=0.4l/NA %v:9_nwO)  
    2. 樣品的最大厚度:大約 2mm(10X/0.2物鏡) K=VYR Y  
    取決于三點(diǎn): ]~CG zV  
              物鏡的景深, 與NA成反比 ^3IO.`|  
              Z軸的最大移動范圍 Ix ! O&_6s  
              激光的穿透力 s$J0^8Q~i  
    3. 樣品的最小光切厚度: 大約0.35 mm PMjqcdBzm  
      取決于兩點(diǎn): 物鏡的數(shù)值孔徑NA 8 团风县| 柞水县| 连平县| 道真| 顺平县| 北宁市| 吉木乃县| 门头沟区| 英超| 黔江区| 朝阳区| 厦门市| 阿克| 新疆| 泸州市| 阳信县| 海晏县| 开远市| 大同县| 重庆市| 青岛市| 江油市| 黑龙江省| 凤台县| 玉树县| 康定县| 万荣县| 怀安县| 望谟县| 溆浦县| 余江县| 都江堰市| 睢宁县| 儋州市| 镇沅| 蒲城县| 德兴市| 阿瓦提县| 遂宁市| 呼和浩特市| 九龙坡区|