(一)  原理和結構特點 fhar&\
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在日常生活中，室內(nèi)飛揚的微粒灰塵是不易被看見的，但在暗的房間中若有一束光線從門縫斜射進來，灰塵便粒粒可見了，這是光學上的丁達爾現(xiàn)象。暗視野顯微鏡就是利用此原理設計的。它的結構特點主要是使用中央遮光板或暗視野聚光器，常用的是拋物面聚光器，使光源的中央光束被阻擋．不能由下而上地通過標本進入物鏡。從而使光線改變途徑，傾斜地照射在觀察的標本上，標本遇光發(fā)生反射或散射，散射的光線投入物鏡內(nèi)，因而整個視野是黑暗的。在暗視野中所觀察到的是被檢物體的衍射光圖像．并非物體的本身，所以只能看到物體的存在和運動，不能辨清物體的細微結構。但被檢物體為非均質時，并大于1／2波長，則各級衍射光線同時進入物鏡，在某種程度上可觀察物體的構造。一般暗視野顯微鏡雖看不清物體的細微結構，但卻可分辨0.004um以上的微粒的存在和運動，這是普通顯微鏡(最大的分辨力為0.2um)所不具有的特性，可用以觀察活細胞的結構和細胞內(nèi)微粒的運動等。 OTy.VT|  
(二)  制作中央遮光板 e^d0zl{  
普通顯微鏡只要聚光器是可以拆卸的，支架的口徑適于安裝暗視野聚光器，即可改裝成暗視野顯微鏡。在無暗視野聚光器時，可用厚黑紙片制作一個中央遮光板，放在普通顯微鏡的聚光器下方的濾光片框上，也能得到暗視野效果。 q ]M+/sl  
1．將顯微鏡聚光器調到最高位置，用低倍鏡對好焦距。 Y'yH;Mz  
2．取下目鏡，從鏡筒中觀察并調節(jié)光闌的大小，使其與鏡筒中所見物鏡的視野相等。  &f"-d  
3．用厚黑紙剪制中央擋光板。外圈直徑與濾光片框架相同，中央部分的大小與調節(jié)好的光闌孔徑一樣(可用半透明的小紙片，放在通光孔處聚光鏡鏡面上，紙上顯示的光斑即為光闌的孔徑，再用圓規(guī)量取大小)。 }3o|EXx=  
4．將中央擋光板放在濾光片框架上，開大光闌進行樣品觀察。 SNfr"2c'h~  
如需使用高倍鏡作暗視野觀察，應按高倍鏡對焦后的視野大小重新制作中央擋光板。  lV`Q{bd+  
保存好各自制作的中央遮光板，以便在后面的實驗中使用。 
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（三）使用方法   5
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1．把暗視野聚光器裝在顯微鏡的聚光器支架上。  vk+VP 1D  
2．選用強的光源，但又要防止直射光線進入物鏡，所以一般用顯微鏡燈照明。  ?kWC}k{  
3．在聚光器和標本片之間要加一滴香柏油，目的是不使照明光線于聚光鏡上面進行全反射，達不到被檢物體，而得不到暗視野照明。  y<HO:kZ8`  
4．升降集光器，將集光鏡的焦點對準被檢物體，即以圓錐光束的頂點照射被檢物。如果聚光器能水平移動并附有中心調節(jié)裝置，則應首先進行中心調節(jié)，使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴格位于一直線上。  ZNf6;%oGG  
5．選用與聚光器相應的物鏡，調節(jié)焦距＜操作方法與普通顯微鏡相同＝，找到所需觀察的物像。  _jJPbKz  
（四）觀察 觀察示教臺上暗視野顯微鏡下的活細胞。在黑暗的背景里，可見細胞、細胞核和細胞器的衍射光圖像。  3|WW
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