一、 光學顯微鏡的發(fā)展歷史
m{bZRkt 早在公元前一世紀,人們就已發(fā)現(xiàn)通過球形透明物體去觀察微小物體時,可以使其放大成像。后來逐漸對球形玻璃表面能使物體放大成像的規(guī)律有了認識。
(<bm4MPf 1590年,荷蘭和意大利的眼鏡制造者已經(jīng)造出類似顯微鏡的放大儀器。1610年前后,意大利的伽利略和德國的開普勒在研究望遠鏡的同時,改變物鏡和目鏡之間的距離,得出合理的顯微鏡光路結(jié)構(gòu),當時的
光學工匠遂紛紛從事顯微鏡的制造、推廣和改進。
|b$>68: 17世紀中葉,英國的胡克和荷蘭的列文胡克,都對顯微鏡的發(fā)展作出了卓越的貢獻。1665年前后,胡克在顯微鏡中加入粗動和微動調(diào)焦機構(gòu)、
照明系統(tǒng)和承載標本片的工作臺。這些部件經(jīng)過不斷改進,成為現(xiàn)代顯微鏡的基本組成部分。
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) 1673~1677年期間,列文胡克制成單組元放大鏡式的高倍顯微鏡,其中九臺保存至今。胡克和列文胡克利用自制的顯微鏡,在動、植物機體微觀結(jié)構(gòu)的研究方面取得了杰出成就。
XSm"I[.g 19世紀,高質(zhì)量消色差浸液物鏡的出現(xiàn),使顯微鏡觀察微細結(jié)構(gòu)的能力大為提高。1827年阿米奇第一個采用了浸液物鏡。19世紀70年代,德國人阿貝奠定了顯微鏡成像的古典理論基礎(chǔ)。這些都促進了顯微鏡制造和顯微觀察技術(shù)的迅速發(fā)展,并為19世紀后半葉包括科赫、巴斯德等在內(nèi)的生物學家和醫(yī)學家發(fā)現(xiàn)細菌和微生物提供了有力的工具。
3wN?|N 在顯微鏡本身結(jié)構(gòu)發(fā)展的同時,顯微觀察技術(shù)也在不斷創(chuàng)新:1850年出現(xiàn)了偏光顯微術(shù);1893年出現(xiàn)了干涉顯微術(shù);1935年荷蘭物理學家澤爾尼克創(chuàng)造了相襯顯微術(shù),他為此在1953年獲得了諾貝爾物理學獎。
E'e8&3!bx 古典的光學顯微鏡只是光學元件和精密機械元件的組合,它以人眼作為接收器來觀察放大的像。后來在顯微鏡中加入了攝影裝置,以感光膠片作為可以記錄和存儲的接收器。現(xiàn)代又普遍采用光電元件、電視攝像管和電荷耦合器等作為顯微鏡的接收器,配以微型電子計算機后構(gòu)成完整的圖像信息采集和處理系統(tǒng)。
<THZ2`tTK3 目前全世界最主要的顯微鏡廠家主要有:奧林巴斯、蔡司、徠卡、尼康。國內(nèi)廠家主要有:江南、麥克奧迪等。
?fbgU 二、 顯微鏡的基本光學原理
FGDGWcRw~ (一) 折射和折射率
(kWSK:l 光線在均勻的各向同性介質(zhì)中,兩點之間以直線傳播,當通過不同密度介質(zhì)的透明物體時,則發(fā)生折射現(xiàn)象,這是由于光在不同介質(zhì)的傳播速度不同造成的。當與透明物面不垂直的光線由空氣射入透明物體(如玻璃)時,光線在其介面改變了方向,并和法線構(gòu)成折射角。
-y&v9OC2- (二) 透鏡的性能
&dhcKO<4 透鏡是組成顯微鏡
光學系統(tǒng)的最基本的光學元件,物鏡目鏡及聚光鏡等部件均由單個和多個透鏡組成。依其外形的不同,可分為凸透鏡(正透鏡)和凹透鏡(負透鏡)兩大類。
:jt;EzCLg% 當一束平行于光軸的光線通過凸透鏡后相交于一點,這個點稱"焦點",通過交點并垂直光軸的平面,稱"焦平面"。焦點有兩個,在物方空間的焦點,稱"物方焦點",該處的焦平面,稱"物方焦平面";反之,在象方空間的焦點,稱"象方焦點",該處的焦平面,稱"象方焦平面"。
V>b2b5QAH, 光線通過凹透鏡后,成正立虛像,而凸透鏡則成正立實像。實像可在屏幕上顯現(xiàn)出來,而虛像不能。
.N~PHyXZR (三) 凸透鏡的五種成象規(guī)律
&=F-moDD 1. 當物體位于透鏡物方二倍焦距以外時,則在象方二倍焦距以內(nèi)、焦點以外形成縮小的倒立實象;
^wx%CdFm'P 2. 當物體位于透鏡物方二倍焦距上時,則在象方二倍焦距上形成同樣大小的倒立實象;
v`#j 3. 當物體位于透鏡物方二倍焦距以內(nèi),焦點以外時,則在象方二倍焦距以外形成放大的倒立實象;
"3{#d9Gs 4. 當物體位于透鏡物方焦點上時,則象方不能成象;
@uI? 5. 當物體位于透鏡物方焦點以內(nèi)時,則象方也無象的形成,而在透鏡物方的同側(cè)比物體遠的位置形成放大的直立虛象。
w(76H^e 三、 光學顯微鏡的成象(幾何成象)原理
Q00R<hu@F 只有當物體對人眼的張角不小于某一值時,肉眼才能區(qū)別其各個細部,該量稱為目視分辨率ε。在最佳條件下,即物體的照度為50~70lx及其對比度較大時,可達到1’。為易于觀測,一般將該量加大到2’,并取此為平均目鏡分辨率。
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