光掃描共焦顯微鏡(Laser Scanning Confocal Microscope，LSCM)是上世紀80年代開始投入實際應用的一種顯微設備。與普通光學顯微鏡相比，LSCM具有更高的分辨率和放大倍率，并可以對觀測樣品進行分層掃描，實現(xiàn)樣品的三維重建和測量分析; 與電子顯微鏡相比，LSCM可以在亞細胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值和膜電位等生理信號及活細胞形態(tài)的實時動態(tài)變化。因此，這項產(chǎn)品的面世是顯微成像技術發(fā)展史中具有劃時代意義的重大進展。LSCM在形態(tài)學、分子細胞生物學、神經(jīng)學、藥理學、遺傳學等生物醫(yī)學領域，以及材料學、地質(zhì)學、水利學等工業(yè)工程領域有著廣泛的應用。根據(jù)應用方向的不同，可分為生物用激光掃描共焦顯微鏡和工業(yè)用激光掃描共焦顯微鏡。
Y g?{x@ mP[u [ | ] @{lnfOESl 一.LSCM的基本原理及結構特點
K.m[S[cy /z :K# 普通光學顯微鏡使用的鹵素燈光源為混合光，光譜范圍寬，成像時樣品上每個照光點均會受到色差影響以及由照射光引起的散射和衍射的干擾，影響成像質(zhì)量。而LSCM結構上采用精密共焦空間濾波，形成物象共軛的獨特設計，激光經(jīng)物鏡焦平面上針孔形成點光源對樣品掃描，于測量透鏡焦平面的探測針孔處經(jīng)空間濾波后，有效地抑制同焦平面上非測量光點形成的雜散熒光和樣品不同焦平面發(fā)射來的干擾熒光。這是因為光學系統(tǒng)物象共軛，只有物鏡焦平面上的點經(jīng)針孔空間濾波才能形成光點圖像，掃描后可得到信噪比極高的光學斷層圖像，分辨率比普通光學顯微鏡提高1.4倍。LSCM的光源為激光，單色性好，基本消色差，成像聚焦后焦深小，縱向分辨率高，可無損傷地對樣品作不同深度的層掃描和熒光強度測量，不同焦平面的光學切片經(jīng)三維重建后能得到樣品的三維立體結構，這種功能被形象地稱為“顯微CT”。
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