在進行免疫標(biāo)記時，通常先將種屬特異IgG分子生物索化，偏光顯微鏡并制備生物素或抗生物素蛋白與標(biāo)記物的復(fù)合物，生物偏光顯微鏡利用生物素與抗生物素蛋白間的高親和性反應(yīng)識別抗原位置。偏光顯微鏡下面是標(biāo)記物與抗生物素蛋白結(jié)合時免疫標(biāo)記模式圖。 q>s`uFRg(  
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此時，生物偏光顯微鏡二抗不是通過化學(xué)交連而是通過免疫學(xué)反應(yīng)與標(biāo)記物偶連。利用不標(biāo)記抗體作為橋分子的主要優(yōu)點是避免了化學(xué)交連對抗體活性可能產(chǎn)生的影響。PAP (Per-oxidase - A nt iperoxidase)法和鐵蛋白一抗鐵蛋白法均屬此例。 MbA\pG
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    偏光顯微鏡隨著研究對象(組織、細胞、順粒)，生物偏光顯微鏡抗原部位(細胞內(nèi)，細胞表面，鑲嵌于膜內(nèi))和觀察方法(透射電鏡、掃描電鏡)的不同，偏光顯微鏡免疫標(biāo)記的具體過程也各不相同。本節(jié)將介紹兩種基本的免疫標(biāo)記方法一包埋前法與包埋后法。 [Qj;/  
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    偏光顯微鏡樣品產(chǎn)生非特異結(jié)合的另一個來源是Fc受體。在巨噬細胞，B-淋巴細胞，嗜中性粒細胞和單核細胞表面均有Fc受體.研究這些細胞的表面抗原時最好使用Fab或F (ab'):代替完整抗體分子，偏光顯微鏡以避免F。生物偏光顯微鏡段與Fc受體的結(jié)合。 ]?K. S6  
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    抗體不純或效價太低都可能造成非特異結(jié)合。偏光顯微鏡免疫標(biāo)記時應(yīng)使用經(jīng)過純化的高效價抗體。生物偏光顯微鏡方法學(xué)不當(dāng)是造成非特異結(jié)合的偏光顯微鏡最常見的原因.具體說來有下面幾種可能: Vw~\H Gs/~  
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    (1)樣品中的靜電荷未封閉或封閉不全，由于靜電相互作用抗體結(jié)合于樣品。偏光顯微鏡在標(biāo)記前，樣品用1%BSA處理以及在一抗和二抗稀釋液中加入1 %BSA都是為了封閉樣品中的電荷。生物偏光顯微鏡如果效果不佳，偏光顯微鏡可試用0. 5 yo雞蛋清蛋白或二抗種屬的正常(偏光顯微鏡未經(jīng)免疫的)血清(10%)或脫脂naifen((200"4%)代替BSA. cUk*C 安塞县| 万源市| 新营市| 六安市| 招远市| 盐津县| 宝丰县| 绵竹市| 丹东市| 太保市| 黑龙江省| 六安市| 青冈县| 榆树市| 蕉岭县| 辛集市| 封开县| 建水县| 井冈山市| 台中市| 绥中县| 漳平市| 建水县| 白水县| 苏尼特左旗| 大荔县| 霸州市| 孟津县| 楚雄市| 综艺| 安庆市| 伊宁市| 绥芬河市| 广宁县| 常宁市| 确山县| 武山县| 定结县| 龙海市| 桃源县| 文水县|