由上面的3個(gè)條件之前的因素不只這里提到的這些 r"0nUf*og:
需要追加: x[)S3U J
7.Z軸位置不只不固定,被采集過(guò)程還有可能是一半在區(qū)域內(nèi)一半在區(qū)域外的 Uqkh@-6-
8.被照明目標(biāo)存在側(cè)向散射,而其側(cè)向散射是可能影響相臨細(xì)胞的 % D&FnTa
9.其實(shí)細(xì)胞的發(fā)光不是4PI空間的均勻分布. `E}2|9
j Sddjs
他們確實(shí)會(huì)得到原來(lái)的3個(gè)技術(shù)要點(diǎn)但卻有所不同 KYlWV<sR
1.分辨率一致; 7}nOF{RH]
2.區(qū)域是否200UM,首先要根據(jù)熒光顯微鏡觀察: A運(yùn)動(dòng)細(xì)胞統(tǒng)計(jì)間距,B運(yùn)行速度,C排列方向(重點(diǎn)是同細(xì)胞每次開啟關(guān)閉流動(dòng)之后排列方式變化) 1Og9VG1^
區(qū)域內(nèi)無(wú)差別采集一致 )of_"gZ$3A
3.效率及靈敏度不是可用,是必須可用靈敏度的至少2倍以上(前提是假設(shè)細(xì)胞統(tǒng)計(jì)最小中心距>2倍細(xì)胞大小,如果2的顯微鏡觀測(cè)并非如此,靈敏倍率還要變化)..(原因是為了采集到準(zhǔn)確數(shù)據(jù),每個(gè)細(xì)胞等效時(shí)間需要拍照2次,從而去除非全細(xì)胞的失誤數(shù)據(jù)) K<V(h#(.@
而3的方式不是絕對(duì)的,還有一種采集方式是累積暴光最后分析,這種需要的靈敏度偏低,可以多次疊加暴光收集統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)... w| >Y&/IX
當(dāng)然無(wú)論采用哪種,樣品階段都要以兼容為目的,連拍單細(xì)胞采集和累積暴光都可以做測(cè)試才行(已有機(jī)器抄襲例外,這里只討論沒有人做過(guò)此產(chǎn)品的情況下該如何進(jìn)行) uH]^/'8vBd
K7CiICe
d{YhKf#~
