| 鄭飛 |
2021-04-22 11:09 |
多重定量PCR系統(tǒng)中多色熒光檢測和光譜串擾校正方法
多色熒光的激發(fā)檢測光路是多重定量聚合酶鏈式反應（ＰＣＲ）系統(tǒng)的核心組成部分。根據(jù)系統(tǒng)對熒光激發(fā)的均一性、熒光檢測的時間和靈敏度需求，提出一種基于磁光開關(guān)和光電倍增管（ＰＭＴ）的多色熒光激發(fā)檢測光路。通過四色 ＬＥＤ單獨激發(fā)和 ＰＭＴ檢測來提高靈敏度；利用磁光效應實現(xiàn)光路的電控切換，配合一維掃描機構(gòu)和濾光片切換裝置，完成９６孔標準 ＰＣＲ板的四色熒光掃描。該設(shè)計避免了多色熒光光路的系統(tǒng)串擾。由于熒光染料本身光譜特性產(chǎn)生的熒光光譜串擾是通過標準迭代的四維聚類分析算法計算串擾矩陣，并通過４種常用染料的實驗研究，對所建熒光檢測系統(tǒng)進行熒光光譜串擾評估。
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