无码日韩精品一区二区免费_极品尤物一区二区三区_国产在线乱码一区二三区_内射女校花一区二区三区

首頁 -> 登錄 -> 注冊 -> 回復(fù)主題 -> 發(fā)表主題

光行天下 -> 照明技術(shù) -> 分光光度分析--熒光光譜分析 [點此返回論壇查看本帖完整版本]

[打印本頁]

jackaroo

2006-06-04 15:14

分光光度分析--熒光光譜分析

當(dāng)紫外光照射某一物質(zhì)時，該物質(zhì)會在極短的時間內(nèi)，發(fā)射出較照射波長為長的光。而當(dāng)紫外光停止照射時，這種光也隨之很快消失，這種光稱為熒光。熒光是一種光致發(fā)光現(xiàn)象。如前所述，分子吸收了某一波長區(qū)的輻射能后，它的電子可躍遷至激發(fā)態(tài)，然后以熱能形式將這一部分能量釋放出來，本身又恢復(fù)到基態(tài)。如果吸收輻射能后處于電子激發(fā)態(tài)的分子以發(fā)射輻射的方式釋放這一部分能量，即為光至發(fā)光。再發(fā)射的波長與分子所吸收的波長可以相同，也可以不同。物質(zhì)所吸收光的波長和發(fā)射的熒光波長與物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)有密切關(guān)系。同一種分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，用同一波長的激發(fā)光照射，可發(fā)射相同波長的熒光，但其所發(fā)射的熒光強度隨著該物質(zhì)濃度的增大而增強。利用這些性質(zhì)對物質(zhì)進行定性和定量分析的方法，稱為熒光光譜分析法，也稱為熒光分光光度法。這種方法具較高的選擇性及靈敏度，試樣量少，操作簡單，且能提供比較多的物理參數(shù)，現(xiàn)已成為生化分析和研究的常用手段。

1. 熒光的產(chǎn)生及其與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系：

1) 熒光的產(chǎn)生：

當(dāng)光進入某種物質(zhì)后，可以有兩種情況：一種是進入物質(zhì)后，能量幾乎不被吸收；另一種是能量被全部或部分吸收。在后一種情況下，在吸收光的過程中，光能被轉(zhuǎn)移給分子。根據(jù)量子理論，分子從光波中吸收能量是不連續(xù)的、整份單位的形式發(fā)生，這些不連續(xù)的微小能量單位被稱為光量子。這也就是說，頻率n的單色光的能量必定是hn的整數(shù)倍。每個光量子的能量

E=hn=hc/λ=hcω,

這里，h為普朗克常數(shù)，6.63×10－34J/s；ω為波長，即1cm長度中電磁波的數(shù)目。從公式可見，能量E與λ成反比。

每個分子具有一系列分子的能級，處于基態(tài)的分子吸收了相應(yīng)頻率的能量后，可以從低能級躍遷到高能級。被吸收的光量子的能量正好等于兩個能級之差。

根據(jù)玻爾茲曼分布，分子在室溫時基本上處于電子的基態(tài)。吸收了紫外－可見光后，基態(tài)電子只能躍遷到單線激發(fā)態(tài)的各個不同的震動能級。躍遷后能量較大的激發(fā)態(tài)分子，在很短時間內(nèi)（10—15s），由于分子間的碰撞或分子與晶格間的相互作用，以熱能形式或內(nèi)轉(zhuǎn)換方式消耗部分能量，從較高震動能級回到最低震動能級。如果這時分子不通過熱能或內(nèi)轉(zhuǎn)換形式來消耗能量，回到基態(tài)，而是通過發(fā)射出相應(yīng)的光量子來釋放能量，回到基態(tài)的各個不同震動能級時，就發(fā)射熒光。由于在發(fā)射熒光前已有一部分能量消耗，所以發(fā)射熒光能量要比吸收紫外光的能量小，也就是熒光的特征波長比吸收的特征波長要長。

2) 熒光與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系：