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    [分享]分光光度分析--熒光光譜分析 [復(fù)制鏈接]

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    只看樓主 倒序閱讀 樓主  發(fā)表于: 2006-06-04
    當紫外光照射某一物質(zhì)時,該物質(zhì)會在極短的時間內(nèi),發(fā)射出較照射波長為長的光。而當紫外光停止照射時,這種光也隨之很快消失,這種光稱為熒光。熒光是一種光致發(fā)光現(xiàn)象。如前所述,分子吸收了某一波長區(qū)的輻射能后,它的電子可躍遷至激發(fā)態(tài),然后以熱能形式將這一部分能量釋放出來,本身又恢復(fù)到基態(tài)。如果吸收輻射能后處于電子激發(fā)態(tài)的分子以發(fā)射輻射的方式釋放這一部分能量,即為光至發(fā)光。再發(fā)射的波長與分子所吸收的波長可以相同,也可以不同。物質(zhì)所吸收光的波長和發(fā)射的熒光波長與物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)有密切關(guān)系。同一種分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì),用同一波長的激發(fā)光照射,可發(fā)射相同波長的熒光,但其所發(fā)射的熒光強度隨著該物質(zhì)濃度的增大而增強。利用這些性質(zhì)對物質(zhì)進行定性和定量分析的方法,稱為熒光光譜分析法,也稱為熒光分光光度法。這種方法具較高的選擇性及靈敏度,試樣量少,操作簡單,且能提供比較多的物理參數(shù),現(xiàn)已成為生化分析和研究的常用手段。 u]z87#4  
    E]P7u"1  
    1. 熒光的產(chǎn)生及其與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系: 6/3oW}O o  
    ~Fe$/*v  
      1) 熒光的產(chǎn)生: h(/& ;\Cr  
    5$?)f&M  
      當光進入某種物質(zhì)后,可以有兩種情況:一種是進入物質(zhì)后,能量幾乎不被吸收;另一種是能量被全部或部分吸收。在后一種情況下,在吸收光的過程中,光能被轉(zhuǎn)移給分子。根據(jù)量子理論,分子從光波中吸收能量是不連續(xù)的、整份單位的形式發(fā)生,這些不連續(xù)的微小能量單位被稱為光量子。這也就是說,頻率n的單色光的能量必定是hn的整數(shù)倍。每個光量子的能量 J*Q+$Ai~  
    KU=+ 1,Jf  
      E=hn=hc/λ=hcω, T!jMh-8  
    <\'aUfF v  
    這里,h為普朗克常數(shù),6.63×10-34J/s;ω為波長,即1cm長度中電磁波的數(shù)目。從公式可見,能量E與λ成反比。 5-RA<d#  
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